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副猪嗜血杆菌辽宁株tbpA基因鉴定与分析

作者: 陈欣 [1] 刘维哲 [1] 王超 [1] 黄晨 [1] 李睿 [1] 尹荣兰 [2] 陈媛媛 [1] 尹荣焕

关键词: 副猪嗜血杆菌 复苏培养 毒力基因 序列分析 生物信息学分析

摘要:副猪嗜血杆菌(HPS)是感染猪产生浆膜炎、关节炎、脑膜炎的病原菌,为明确辽宁省副猪嗜血杆菌tbpA基因的保守性、遗传变异情况以及功能,以复苏培养后的菌株为研究对象,利用细菌学常规技术和PCR方法对HPS及其血清型进行验证,将目的基因连接于T5载体上,并转化到大肠杆菌感受态细胞中,获得克隆质粒,对不同血清型该基因序列进行PCR鉴定.通过NCBI网站中BLAST进行序列比对,并且运用DNA star软件进行核苷酸同源性分析和遗传变异规律分析.通过在线软件对tbpA编码蛋白的氨基酸组成、分子量、等电点、亲疏水性以及二级结构等进行分析.结果表明:从保存菌的HPS中成功复苏了4型、5型、9型和14型菌株;经PCR扩增这4种血清型HPS的tbpA基因长度均为2700bp;tbpA基因与参考菌株核苷酸同源性范围为86.5%~97.9%,4型和5型tbpA基因与84-15995、84-17975、H425亲缘性较近,9型tbpA基因与SW124和174亲缘性较近;14型tbpA基因与NO.4亲缘性较近;4种血清型tbpA基因与瑞典菌株D74在两个不同分支上,具有较远的亲缘关系.4种血清型tbpA基因编码蛋白分别有874,871,918,915个氨基酸组成;等电点分别为9.51,9.30,8.65,8.76;该蛋白属于亲水性蛋白;该蛋白的二级结构主要由α 螺旋、 无规则卷曲和伸展链构成.tbpA基因与美国株84-15995(KT588784.1)、 德国株H425(KT588778.1)、 日本株NO.4(KT588774.1)同源性相对较高,亲缘关系较近,但是也存在一定的差异性,该结果可为建立HPS最新基因突变跟踪提供参考依据;同时,通过对tbpA蛋白进行生物学信息分析,为进一步研究tbpA基因的功能奠定了分子基础.


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